作者 | 高雅麗 韓揚(yáng)眉
近日，多個科研團(tuán)隊(duì)對外宣稱已成功研發(fā)抗體試劑盒，最快3分鐘就能得知新型冠狀病毒檢測結(jié)果，有些產(chǎn)品也進(jìn)入國家藥品監(jiān)督管理局審批程序。
這種新的檢測方法是否能替代已有的核酸檢測？不同方法有何區(qū)別？距進(jìn)入臨床使用還有多遠(yuǎn)？
中華醫(yī)學(xué)會檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會主任委員王成彬表示：“抗體檢測盡管有便捷、快速的優(yōu)勢，但目前還不可能替代核酸檢測。如何將病毒抗體（抗原）檢測方法與病毒核酸檢測方法聯(lián)合應(yīng)用，發(fā)揮各自優(yōu)勢，急需進(jìn)行評價和驗(yàn)證?！?/p>
河南農(nóng)業(yè)大學(xué)校長、中國工程院院士張改平也就上述問題接受了采訪。
《中國科學(xué)報》：目前針對新型冠狀病毒，主要的試劑檢測辦法有哪些？
▲ 王成彬：
目前針對新型冠狀病毒檢測試劑分成兩類，一類是對病毒的直接檢測，一類是間接檢測。
直接檢測就是目前實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用的針對病毒的核酸檢測，檢測新型冠狀病毒基因中某些特定核酸序列的存在，是目前公認(rèn)的新型冠狀病毒肺炎實(shí)驗(yàn)室診斷金標(biāo)準(zhǔn)方法。
間接檢測試劑分為針對病毒抗體檢測和針對病毒抗原的檢測?？贵w檢測試劑是檢測血清中由病毒進(jìn)入人體后刺激人體產(chǎn)生的IgM或IgG抗體，IgM抗體出現(xiàn)較早，IgG抗體出現(xiàn)較晚。病毒抗原檢測主要是檢測病毒表面的一些蛋白質(zhì)。
《中國科學(xué)報》：目前發(fā)布的抗體檢測試劑盒迅速高效，它會替代核酸檢測試劑嗎？
▲張改平：
抗體檢測，尤其適用于大量疑似病例的檢測，無癥狀感染者也可用。
這個在將來也大有用處，我們可以用在人的流行病學(xué)篩選調(diào)查，比如調(diào)查1萬人，通過抗體檢測，到底有多少人感染過這個病毒而沒有癥狀，就能得出數(shù)據(jù)了。
而快速檢測全病毒抗原現(xiàn)在是不太可能的，還得等一等。因?yàn)榭乖瓩z測通常需要更高的敏感性，通常樣品中含量很低，而這個新型冠狀病毒剛出來，認(rèn)識抗原、跟蹤抗體的研究都需要一定的時間，針對病毒的單克隆抗體等研制也需要時間。
▲王成彬：
衛(wèi)健委發(fā)布的《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第六版）》中，實(shí)驗(yàn)室確診病例的依據(jù)還是核酸檢測陽性，也增加了基因測序，還沒有提及其他的檢測方法?？贵w檢測是間接檢測方法，盡管有便捷、快速的優(yōu)勢，但與核酸檢測比較有其應(yīng)用的局限性，目前還不可能替代核酸檢測。
如何將間接的病毒抗體（抗原）檢測方法與直接的病毒核酸檢測方法聯(lián)合應(yīng)用，發(fā)揮各自優(yōu)勢，急需要進(jìn)行評價和驗(yàn)證，據(jù)我了解相關(guān)部門已開始啟動該項(xiàng)工作。
《中國科學(xué)報》：近日，麻省理工學(xué)院稱其開發(fā)的核酸檢測系統(tǒng)繞開PCR擴(kuò)增、采用等溫擴(kuò)增技術(shù)RPA，有望一小時內(nèi)實(shí)現(xiàn)病毒檢測。
那么目前國內(nèi)核酸檢測技術(shù)與應(yīng)用有哪些前沿技術(shù)開發(fā)，還有哪些難點(diǎn)需要克服？
▲王成彬：
現(xiàn)在反映的核酸檢測“假陰性”問題主要是用核酸檢測確診患者假陰性的問題，而不是核酸檢測本身假陰性的問題。
至于等溫擴(kuò)增技術(shù)，這是個很好核酸檢測方法，它的特點(diǎn)也是對核酸分子進(jìn)行擴(kuò)增檢測，但不需要在不同溫度間的變化環(huán)節(jié)，因此靈敏度高、簡便快速、成本低。
但是目前由于不太好解決的易形成非特異擴(kuò)增造成“假陽性”結(jié)果等問題，還沒有在臨床實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用，需要繼續(xù)進(jìn)行改進(jìn)。
近期，也有一些專家推薦更靈敏的數(shù)字PCR方法、可以檢測更多病毒基因位點(diǎn)的RT-PCR毛細(xì)管電泳方法、高通量檢測的核酸質(zhì)譜方法、更可靠的基因測序方法，但是這些先進(jìn)的前沿檢測技術(shù)存在三個問題：
一是時間太長，其它方法有些要用10個小時以上，甚至于24個小時或更長時間；
第二，實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢驗(yàn)中大多數(shù)用的是實(shí)時熒光RT-PCR方法，如果換成新的，實(shí)驗(yàn)室還得重新買設(shè)備、人員重新培訓(xùn)，成本太高；
第三，檢測過程相對復(fù)雜，對檢測人員素質(zhì)要求高，檢測質(zhì)量不易控制。因此，以后如何對前沿檢測技術(shù)進(jìn)行簡便易用的改良并在臨床檢測中廣泛應(yīng)用有必要成為關(guān)注重點(diǎn)。
《中國科學(xué)報》：據(jù)國務(wù)院聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制新聞發(fā)布會消息，目前已有七個診斷檢測試劑獲批上市。在實(shí)際工作中，是否有一個行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)去評價新型冠狀病毒檢測試劑的質(zhì)量？
▲王成彬：
任何檢測試劑獲準(zhǔn)上市之前都要經(jīng)過一系列嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量評價和臨床應(yīng)用評價，這些評價肯定是要有評價標(biāo)準(zhǔn)的，而且大多數(shù)產(chǎn)品在進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)室實(shí)際應(yīng)用前，至少還要做臨床患者的標(biāo)本檢測的性能驗(yàn)證。
目前臨床實(shí)驗(yàn)室所開展的檢測項(xiàng)目，國家和地方臨檢中心會定期對各個實(shí)驗(yàn)室之間的檢測質(zhì)量進(jìn)行評價。
但由于本次疫情的特殊性，時間的緊迫性，很多廠家所研發(fā)試劑來不及完成正常流程，特別是無法得到一定數(shù)量臨床患者標(biāo)本的驗(yàn)證，有些廠家只能用新型冠狀病毒目標(biāo)RNA序列通過噬菌體蛋白外殼包裹等方式模擬真實(shí)標(biāo)本中的病毒進(jìn)行驗(yàn)證。
目前有超過130多家廠家在生產(chǎn)新型冠狀病毒相關(guān)檢測試劑，質(zhì)量上的參差不齊在所難免。
但也并不說如此多廠家之間可能存在質(zhì)量上的參差不齊，就一定意味著目前實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果不可靠，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室選購哪一家試劑應(yīng)用，都會進(jìn)行慎重評估和選擇。
▲張改平：
國家批準(zhǔn)商業(yè)化試劑時需要復(fù)雜的鑒定過程，只有企業(yè)才能申請生產(chǎn)。
實(shí)際上，大家都容易被誤導(dǎo)，很多人講10分鐘、3分鐘出結(jié)果，但實(shí)際上對于基因檢測這么短時間是不行的。
現(xiàn)在醫(yī)院大部分用的都是試紙檢測加實(shí)時熒光PCR檢測，但是整個檢測過程還包括采樣、處理樣本等等許多步驟，總時間是大于2小時左右。
此外，對于試紙來說，3分鐘、5分鐘差別并不大，主要是試紙材料的改進(jìn)。
比如，試紙上的層析膜會固定不同生物活性材料從而形成“檢測線”，膜的孔徑一般是微米級的，要提高精度和敏感性，需要把孔徑縮小，使待檢樣品溶液流的慢些；要提高速度，需把孔徑放大，使待檢樣品溶液流的快些。
當(dāng)然還有其他方面，比如標(biāo)記的密度、抗體的親和力等。
《中國科學(xué)報》：您認(rèn)為此次抗擊疫情過程中，我們在檢測試劑研發(fā)方面能收獲哪些經(jīng)驗(yàn)和啟示？
▲張改平：
快速檢測技術(shù)需要長期積累和技術(shù)積淀，而我們正是得益于在試紙快速檢測方面有著長達(dá)20十余年的原始創(chuàng)新積累和技術(shù)儲備，在國內(nèi)率先建立了抗原、抗體及小分子半抗原三大快速檢測技術(shù)體系，才能在此次疫情防控中快速制備出臨床所需要的快速檢測試紙，為國家和社會貢獻(xiàn)應(yīng)有之力。
封面圖片來源：中新網(wǎng)
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